В типичном синтезе ДНК, РНК и неприродных нуклеиновых кислот этап снятия защиты и связывания играет решающую роль.
Стадия снятия защиты заключается в удалении группы ДМТ на твердом носителе или 5'-гидроксильной группы предыдущего нуклеозида с помощью органической кислоты и обнажении гидроксильной группы для следующей стадии связывания.3% трихлоруксусная кислота в дихлорметане или толуоле в основном используется для проведения стадии снятия защиты.Концентрация трихлоруксусной кислоты и время снятия защиты (время деблокирования) определяют чистоту конечных продуктов.Низкая концентрация и недостаточное время деблокирования оставляет непрореагировавшую группу ДМТ, что снижает выход и увеличивает количество нежелательных примесей.Длительное время деблокирования может привести к депурину синтезированных последовательностей, образуя неожиданные примеси.
Этап связывания чувствителен к содержанию воды в растворителях и влажности воздуха.Концентрация воды при синтезе должна быть менее 40 ppm, лучше менее 25 ppm.Чтобы сохранить условия безводного синтеза, синтез нуклеиновых кислот следует проводить в среде с низкой влажностью, поэтому мы рекомендуем нашим клиентам использоватьРастворенное оборудование амидитов, который может растворять порошкообразный или маслянистый фосфорамидит в безводном ацетонитриле, чтобы избежать контакта с воздухом.
Поскольку растворение фосфорамидитов лучше в безводной среде, а молекулярные ловушки поглощают следовые количества воды в реагентах и амидите, необходимо подготовитьМолекулярные ловушки.Мы рекомендуем сито 2 г для бутылок с реагентами 50-250 мл, 5 г для бутылок с реагентами 250-500 мл, 10 г для бутылок с реагентами 500-1000 мл и 20 г для бутылок с реагентами 1000-2000 мл.
Растворение фосфорамидитов следует проводить в инертной атмосфере, а замену реагентов-активаторов и ацетонитрила производить своевременно.Реагенты Capping и Oxidation следует использовать как можно скорее, открытые реагенты имеют меньший срок хранения и меньшую активность при синтезе.
Время публикации: 09 августа 2022 г.