Основной принцип синтеза ДНК

Химический синтез ДНК основан на стратегии твердофазного синтеза и химии фосфорамидитов.В отличие от биологического синтеза ДНК, материалом при химическом синтезе ДНК является ДМТ (4,4-диметокситритил) и модифицированный фосфорамидитом дезоксирибоксизид, как показано на рисунке 1. Синтез ДНК проводится на твердой основе (мы можем предложить различныеКолонка для олигосинтеза), то есть CPG (стекло с контролируемой пористостью) и PS (полистирол), а весь синтез проводится наСинтезатор ДНК/РНК, которое является нашим основным оборудованием, имеет различные модели, такие как: одноканальный синтезатор HY, HY-12, HY-192 и т. д., направление синтеза от 3 'до 5', и нуклеотид вводится в твердую основу через один цикл синтеза.Обычно цикл синтеза состоит из четырех этапов: снятие защиты, связывание, блокирование и окисление (рис. 2).Снятие защиты настроено на удаление группы DMT на твердом носителе или 5'-гидроксильной группы на предыдущем нуклеозиде, в качестве реагента для снятия защиты используется 3%-ная трихлоруксусная кислота в дихлорметане.Затем дезоксирибоксизид, модифицированный фосфорамидитом, подвергали воздействию гидроксильной группы с помощью активатора, т.е. 5-этилтиотетразола или 4,5-дицианоимидазола, с образованием фосфитетриэфира (III), и осуществляли стадию связывания.Стадия кэпирования проводится для блокировки непрореагировавшей гидроксильной группы во время стадии связывания, чтобы минимизировать образование нежелательных дефектных последовательностей.Наконец, нестабильный фосфиттриэфир (III) окисляется до химически стабильного фосфортриэфира (V) с йодом в качестве окислителя в присутствии пиридина.

Синтезированная ДНК может быть отщеплена от твердой подложки путем аминолиза, 2-цианоэтил-защищенная группа фосфортриэфира и амид нуклеинового основания расщепляются одновременно, планшеты для синтеза и колонки для синтеза в штативах помещаются непосредственно в реакционную камеру. принадлежащийОборудование для снятия защиты.Сырая ДНК может быть получена с помощью ВЭЖХ, электрофореза и ОРС по требованию. Мы также можем предоставить вамОчистное оборудованиедля постобработки.