Очистное оборудование для очистки олигонуклеотидов

1. Очистка гель-электрофореза и хроматографии.
Для очистки используйте денатурирующую хроматографию электрофореза в полиакриламидном геле.Денатурирующим агентом обычно является 4М формамид или 7М мочевина, концентрация акриламида составляет 5-15%, а доля метакриламида составляет в основном 2-10%.
После электрофореза необходимо определить положение полосы нуклеиновой кислоты под воздействием ультрафиолетового света, гель, содержащий целевую нуклеиновую кислоту, отсекают, нуклеиновую кислоту разбивают и выщелачивают, а затем выщелачивающий раствор концентрируют, обессоливают, количественно и лиофилизировано.

2. ДМТ-Он, очистка ВЭЖХ.
При выборе режима DMT-On во время синтеза неочищенный продукт центрифугировали и концентрировали при комнатной температуре для удаления избытка аммиака после аминолиза.
Разделение проводили на колонке С18 с ацетонитрилом и 10% триэтиламиноуксусной кислотой (ТЭАА) в качестве элюента.После завершения элюирования его концентрируют, а затем группу ДМТ удаляют трифторуксусной кислотой.После нейтрализации некоторые соли и небольшие молекулы удаляются через отсечную трубку и, наконец, обессоливаются.

Этим методом можно получить продукт более высокой чистоты, но необходимо обратить внимание на возникновение депуринации.

3. Удаление ДМТ, очистка ВЭЖХ.
Отбирали DMT-Off во время синтеза, а неочищенный продукт центрифугировали и концентрировали при комнатной температуре для удаления избытка аммиака после аммонолиза.
Разделение проводили на колонке С18 с ацетонитрилом и 10%-ным раствором триэтиламиноуксусной кислоты в воде в качестве элюента.После завершения разделения и количественного определения аликвоты лиофилизируют.

Этот метод требует тщательной настройки условий разделения, а также позволяет получить относительно чистые целевые молекулы.